多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段45-50nt的发夹结构RNA（smal
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标本(组织细胞，分泌物)加PBS或生理盐水离心洗涤后，加消化 裂解液20～50ul(0.5%NP-40和0.5%吐温-20)，95
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异硫氰酸胍法提取制备模板核酸此法主要用于RNA的提取.标本为组织细胞及血清等.1.异硫氰酸胍消化液异硫氰酸胍4mol/L柠檬酸钠(
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1.用蒸馏水将电泳槽和梳子冲洗干净.放在水平桌面上，并架好梳子.2.根据核酸分子量的大小配制不同浓度的琼脂糖凝胶，一般200～40
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用5-10ml 1xNTE(NaCl 100mmol/L ,Tris-HCl 10mmol/l pH7.4，EDTa 1mmol/
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含106个细胞液加等量纯化溶液[4mol/L胍基硫氰酸盐，25mmol/L柠檬酸pH7.0，0.5%肌氨酸（sarcosyl），0
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1.仪器装置电泳室及直流电源同纸电泳。2.试剂(1) 醋酸-锂盐缓冲液(pH3.0) 取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢
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1.仪器装置通常由稳流电泳仪和圆盘或平板电泳槽组成。其电泳室有上、下两槽,每个槽中都有固定的铂电极，铂电极经隔离电线接于电泳仪稳流
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SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白分子量,是根据大多数蛋白都能与阳离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复合物,使蛋白
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1）膜的处理：同DNA的打点法。2）RNA变性：将提取的RNA与50μl 20×SSC/甲醛（30μl 20×SSC加20μl甲醛
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（1）将200mg组织在冰浴条件下用消毒剪刀充分剪碎，加4ml 1×RSB缓冲液（10mmol/L Tris, pH7.4;10m
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组织原位杂交简称原位杂交，指组织或细胞的原位杂交，它与菌落的原位杂交不同。菌落原位杂交需裂解细菌释出DNA，然后进行杂交。而原位杂
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一、DNA酶切反应1、将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号,用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限
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当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的3'羟基末端。同时该酶具有从5'→3'的
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随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于
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Southern杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤：(1) 酶切DNA, 凝
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1.原理 用酰化剂3--（4-羟苯基）丙酸-N琥珀酰胺酯（Bolton-Hunter试剂）做连接试剂，将125I标记在羟苯基的2，
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（1）石蜡切片脱蜡入水后，置0.1mol/l PBS pH7.2冲洗5min；冰冻切片直接入PBS冲洗5min。（2）0.1mol
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1.组织前处理在组织制片中以冷冻切片（厚10～30μm）最佳。切片贴在预先清洁，高温处理并涂以粘附剂载玻片上，先在37℃预干燥4h
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1、常规脱蜡浸入0.01mol/LPBS；2、用0.2mol/L盐酸处理5min；3、蛋白酶K(25μg/m1)消化37℃ 15m
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