（一）细菌的收获和裂解1.收获1）将2ml含相应抗生素的LB加入到容量为15ml 并通气良好（不盖紧）的试管中，然后接入一单菌落，
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（一）在丰富培养基中扩增质粒许多年来，一直认为在氯霉素存在下扩增质粒只对生长在基本培养基上的细菌有效，然而在带有pMBl或ColE
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（一）聚乙二醇沉淀法质粒DNA这里介绍的方法（R.Tresman,个人通讯）已卓有成效地用于纯化碱裂解法制备的质粒DNA。1）将核
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（一）吸附剂、溶剂与被分离物性质的关系：液一固吸附层析是运用较多的一种方法，特别适用于很多中等分子量的样品（分子量小于1，000的
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薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法。一般将柱层析用的吸附剂撒布到平面如玻璃片上，形成一薄层进行层析时一即称薄层层析。其原理与
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引物设计有3 条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非
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增加PCR的特异性：1.primersdesign这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合
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pcr产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带pcr反应
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1、受体菌的培养从平板上挑取新的活化后的E.coliTG1单菌落，接种于5ml LB液体培养基中，37℃下振荡培养12小时左右，取
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1、感受态细胞的概念重组DNA分子体外构建完成后，必须导入特定的宿主（受体）细胞，使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性
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DNA经过限制性内切酶消化和凝胶电泳后，放入碱性溶液中使其变性，将变性后的单链DNA从凝胶中按原来位置和顺序用滤纸吸印转移到硝酸纤
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在RNA凝胶电泳之前，先用乙二醛等变性剂处理RNA，再在适宜条件下电泳使充分变性的RNA直接吸印到硝酸纤维膜上。固定后除去变性剂，
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1 从37℃培养16～20h的新鲜平板中挑取一个单菌落（如大肠杆菌DH52），或1ml新鲜的16～20h过夜培养物，转到一个含有1
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(1) 目的基因组DNA片段的制备基本原则：DNA片段之间存在部分重叠序列；DNA片段大小均一。分离和纯化真核生物基因组DNA时，
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分子生物学实验指南第3版，冷泉港出版社出版，被誉为“分子生物学实验的圣经”。英文原版，PDF文档。Molecular Clonin
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随着PCR技术的发展，人们在此基础上建立起了一系列基于基因分离的新技术新方法。如mRNA差别显示技术（DDRT-PCR）、以及进一
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1 基因芯片技术分离目的基因生物芯片是高密度固定在固相支持介质上的生物信息分子的微列阵。列阵中每个分子的序列及位置都是已知的，并按
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1.体细胞杂交法 体细胞是生物体除生殖细胞外的所有细胞。将从身体分离的体细胞做组织培养进行遗传学研究的学科称为体细胞遗传学（som
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1 质粒DNA的提取质粒DNA是细菌细胞中小的共价闭合环状双链DNA。由于基因工程中使用的载体主要是质粒，因此，质粒DNA的提取和
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使用法玛西亚公司的DNA/RNA浓度测定仪，测定样品A260和A280值。根据A260/ A280比值，估测RNA质量。一般A26
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